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標準品的制備、鑒定、計量

1．標準品的制備：標準品的制備是非常復(fù)雜的問題，也是標記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標準品（或商品化試劑中標準品）的制備。

   1）基質(zhì)的制備：如前所述，作為標準品的介質(zhì)（基質(zhì)）成分應(yīng)與被測樣品相同。對大多數(shù)用于測定血清中某物質(zhì)的標準品，應(yīng)用不含被測物質(zhì)的零血清制備，以求反應(yīng)的介質(zhì)環(huán)境相當。但有時零值血清的制備十分困難，所以有些標準品用適當?shù)木彌_液制備，并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白（一般用1%～2%的牛血清白蛋白），以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近。 

   零值血清的制備方法有： 

   （1）吸附法：血清中小分子物質(zhì)如三碘甲狀腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）等，可用活性炭吸附去除。這種方法簡便，但待測物質(zhì)難以清除干凈，而且大分子活性物質(zhì)不能用此法進行制備。 

   （2）反復(fù)凍融法：對大分子活性物質(zhì)可選用低值血清，經(jīng)反復(fù)凍融使被測物質(zhì)失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活，但也難以得到真正的零值血清。 

   （3）親和層析法：用特異性抗體制備親和層析柱，用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質(zhì)量的零值血清，但本法比較復(fù)雜而且成本也高。 

    2）標準物純品的選擇：應(yīng)選擇高化學(xué)純和高免疫純的純品作標準品。其中免疫純尤為重要，在標準品中不應(yīng)含有與被測物質(zhì)有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。

    3）標準品的制備：先用零值血清配置高濃度的標準品，然后根據(jù)實驗系統(tǒng)的要求，用零值血清將高值血清稀釋至應(yīng)有的濃度，制成符合預(yù)定要求的，由不同濃度組成的系列標準品。2．標準品的鑒定 

1）免疫活性的鑒定：選用高特異性的抗血清分別作*標準品（如WHO的參考品或國家標準品）的待鑒定標準品的劑量反應(yīng)曲線，并觀察兩條曲線的平行性。如兩條劑量反應(yīng)曲線平行，說明兩種物質(zhì)對同一抗體有相同的親和力，即二者是同質(zhì)性物質(zhì)。如兩條劑量反應(yīng)曲線不平行，說明兩種物質(zhì)具有異質(zhì)性，因而這一待鑒定的標準品是不能使用的。 

2）濃度的標定：用已鑒定過的，免疫活性合格的標準品，與*的標準品作濃度相同的劑量反應(yīng)曲線。此時，兩條劑量反應(yīng)曲線應(yīng)該是基本重合的。如果兩者平行但不重合，則取兩條劑量反應(yīng)曲線的50%結(jié)合處的相應(yīng)劑量（ ED50 ）計算二者的換算系數(shù)，然后調(diào)整待鑒定標準品的濃度，直至使兩條劑量反應(yīng)曲線*或基本重合為止。 

3．標準品的計量：許多小分子抗原或半抗原已能得到純品或進行合成，它們對作為標準品的要求可以得到基本的滿足，其計量多直接用單位體積中的重量表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。zui近WHO推薦用質(zhì)量單位取代重量單位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對大分子的活性物質(zhì)則比較復(fù)雜。由于得不到的純品，故很難直接用單位體積中的重量或單位體積中的質(zhì)量計量。因此，常用該物質(zhì)的生物活性單位表示，如IU / L、mIU / L等。